奶茶杯底的“珍珠”，竟能成为核酸检测的新突破!

这可不是什么新品奶茶口味，而是深圳大学李自达团队搞出来的一个超酷核酸检测新方法。

传统ddPCR（数字PCR）检测病毒核酸，需要购买昂贵探针以及设备。

而李自达团队发明的方法，不用荧光，不用复杂流程，对样品摇一摇，仅靠流式细胞仪捕捉散沉淀射光特征，就能测病毒核酸含量。    

   “魔法珍珠”炼成记01

核心原理发现

这个灵感源自他们扎实的生物化学知识以及对物理原理的深刻理解。

首先，他们发现环介导等温扩增（LAMP）的反应过程中会产生焦磷酸镁的白色沉淀（镁离子Mg2? + 焦磷酸 P?O??? → 焦磷酸镁 Mg?P?O?↓ ）。

每当DNA（脱氧核糖核酸）聚合酶把一个dNTP接到链上时，就会释放一个焦磷酸分子，因此DNA合成和焦磷酸释放是同步的。

所以，如果把焦磷酸镁沉淀做成微球，通过统计阳性微球在总微球中的比例，就能推算出样本中病毒核酸的初始浓度。

关键问题解决

李自达团队需要解决的问题，是如何避免使用昂贵的荧光探针进行标记，将沉淀物做成微球，从而准确地测定核酸。

他们先将含LAMP反应液和琼脂糖的水相与油相混合，通过涡旋产生大量微小液滴，液滴内完成扩增后才会生成焦磷酸镁沉淀。

当涡旋产生强烈剪切力，把水相打成小液滴。油相中的表面活性剂包覆液滴表面防止合并，从而形成稳定的水包油乳浊液。

就像你在做蛋黄酱时，把油和蛋黄（含有表面活性剂）混合，然后快速搅拌，油就会被分散成小液滴。

由于琼脂糖在高温下是液体，低温下是固体。他们利用这个特性就可以瞬间将液滴变成固体微球，像把沉淀物装进一个一个透明的球里。

流式细胞仪检测

现在来到整个实验最精彩的部分。当流式细胞仪发射激光，那么这些透明小球在照射下，会产生前向散射激光（FSC），以及侧向激光（SSC）。

FSC是实验的关键，可以测定微球体积，从而进行数字定量；而SSC用来判断微球内是否包含沉淀，判断是否阳性。     

  “摇一摇”就出结果：比传统方法强在哪？02

所以在流式细胞仪的加成下，用这个方可以轻松检测EB病毒DNA。在核酸浓度范围为2.4至2.4 × 10? copies/μL时，该方法能提供准确的定量结果 。并且和传统的金标准方法（数字PCR和qPCR）基本一致（R2=0.93）！

这个方法，他们起了个名字叫Flow-LAMP。它最大的好处就是省钱又省事。你再也不用买昂贵的荧光染料和专用荧光检测设备，基层医院只要有一台流式细胞仪，就可以快速检测。

如果让你给这项技术起个更潮的名字，你会叫它什么？评论区见。

关注原创公众号小黄的仪器宇宙，获取更多前沿进展。参考文献：PMID: 41076639核心论文链接地址：https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2314030121，这是PNAS公开地址；本文原文地

址为：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.4c04552声明：本微信注明来源的稿件均为转载，仅用于分享，不代表平台立场，如涉及版权等问题，请尽快联系我们，我们第一时间更正。